Analiza cerebrospinalne tekućine (likvora) moćan je alat za poboljšanje otkrivanja različitih procesa koji se odvijaju unutar središnjeg živčanog sustava, poput krvarenja, upala, infekcija, tumora i drugih kliničkih stanja. Osim toga, serijske procjene spojeva u likvoru (kao što su hormoni, lijekovi, neurotransmiteri, biomarkeri, metaboliti i virusi) jednako su ključne u osnovnim i translacijskim istraživanjima. Volumen likvora u središnjem živčanom sustavu održava se stabilnim sekrecijom i apsorpcijom.
I. Operativna razmatranja
Likvor se tipično prikuplja putem cerebralne komore ili lumbalne punkcije. Lumbalna punkcija nosi relativno manji rizik od komplikacija kod primata osim ljudi jer je kod većine vrsta mjesto lumbalne punkcije udaljeno od kraja leđne moždine. Nužne su pravilna anestezija i aseptičke tehnike, uključujući pripremu mjesta kao što je brijanje i korištenje sterilnih materijala. Trebaju se koristiti barem sterilne rukavice, štrcaljke i igle, uz razmatranje sterilnih kirurških zastora. Prikupljanje likvora obično se izvodi u bočnom ležećem položaju, sternalnom ležećem položaju ili sjedećim položajima, poboljšavajući pristup moždanim komorama ili povećavajući intervertebralni prostor fleksijom vrata ili kralježnice. Veličina i duljina odabrane igle trebala bi odgovarati vrsti i veličini primata koji nisu ljudi. Tehnike, oprema, potrošni materijal koji se koristi tijekom postupka i perioperativna skrb razlikuju se ovisno o vrsti, ciljevima istraživanja i željama kliničkog veterinara.
Neki istraživački protokoli mogu zahtijevati kontinuirano prikupljanje likvora tijekom vremena ili uzimanje uzoraka likvora od neanesteziranih subjekata. Za ove protokole, kontinuirano prikupljanje likvora iz budnih rezus majmuna može se postići putem dugotrajno ugrađenih likvorskih katetera spojenih na potkožne otvore za prikupljanje.
Autor se potrudio pronaći najnovije reference u vezi s ukupnim volumenom likvora, granicama ili preporukama za duralne punkcije, učestalošću prikupljanja, sigurnim volumenom povlačenja i stopama nadoknade likvora. Literatura o ovom aspektu ograničena je za većinu neljudskih primata. Nadalje, metode prikupljanja se razlikuju, budući da ankete članova Udruge veterinara neljudskih primata pokazuju da različite institucije uspješno koriste različite metode za prikupljanje KKS. Stoga autor daje razmatranja i preporuke za prikupljanje likvora na temelju postojećih najboljih dokaza.
Za referencu, prethodne studije su utvrdile da je prividni volumen likvora kod odraslih mužjaka rezus majmuna (8.0-10.6 kg) 10+/-0.06 mL, s brzinom protoka likvora od 0.018+/-0.003 mL/min. Brzina stvaranja likvora u rezus majmuna kreće se od 28.6-44.2 μL/min. U ovom su području potrebna daljnja istraživanja primata osim čovjeka kako bi se olakšao razvoj poučnijih preporuka.
II. Moguće nuspojave
Iako su komplikacije tijekom prikupljanja likvora kod primata rijetke, anatomske varijacije i nepravilne ili neadekvatne tehničke metode mogu dovesti do oštećenja uzorka ili komplikacija kao što su krvarenje, hernijacija, infekcija, oštećenje moždanog debla, leđne moždine ili korijena živaca i životinja nelagoda. Iako su te komplikacije rijetke, mogu ugroziti dobrobit životinja.
Zbog uključenih rizika, CSF bi trebao prikupiti veterinar ili obučeno veterinarsko osoblje. Za neuspješne pokušaje prikupljanja likvora, postupci mogu varirati. Uobičajena je praksa dopustiti do tri neuspješna pokušaja jedne osobe. Nakon trećeg neuspješnog pokušaja, druga kvalificirana osoba trebala bi preuzeti dužnost. Ako druga osoba ne može prikupiti CSF nakon tri pokušaja, pokušaje treba prekinuti. U međuvremenu, životinja će dobiti odgovarajući analgetski tretman i oporaviti se od anestezije. Promjena mjesta sakupljanja (npr. iz moždanih komora u lumbalne) nakon neuspješnih pokušaja često rezultira uspjehom. Ako dođe do neuspjelog pokušaja bez navođenja snimanja, može se koristiti postavljanje igle uz pomoć fluoroskopije. Osim povećanja stope uspješnosti, slikovno vođenje također može smanjiti stopu traumatskih uboda.
Postoperativno praćenje treba nastaviti sve dok se životinja ne vrati u svoj kavez i ne može zadržati uspravno držanje bez potpore. Praćenje životinja treba trajati najmanje 24 sata ili prema protokolu odobrenom od strane Institucionalnog odbora za skrb i korištenje životinja (IACUC). Praćenje treba uključivati procjene osnovnih fizioloških, bihevioralnih i lokomotornih parametara. Posebno treba procijeniti znakove neurološke disfunkcije, uključujući ali ne ograničavajući se na letargiju, depresiju, komu i znakove pritiskanja glave. Glavobolje i posljedična intrakranijalna hipotenzija nakon prikupljanja likvora nisu neuobičajene u humanoj medicini. Uzimajući u obzir ovu potencijalnu komplikaciju kod primata osim ljudi, liječenje analgeticima treba se provoditi tijekom operacije i nastaviti 2-3 dana postoperativno ili prema potrebi na temelju postoperativnih opažanja povezanih s ponašanjem povezanim s glavoboljom ili bolovima u kralježnici. Najučinkovitiji analgetski režim može uključivati sveobuhvatno liječenje započeto prije operacije.
III. IACUC razmatranja i vođenje evidencije
IACUC bi trebao biti upoznat s postupcima vezanim uz prikupljanje likvora i svim mogućim komplikacijama te ih pregledavati najmanje jednom godišnje. Sve relevantne informacije, kao što su doze lijekova, prijeoperacijske pripreme, prikupljeni volumeni likvora, učestalost prikupljanja te kratkoročni i dugoročni postoperativni oporavak, trebaju biti opisani u IACUC protokolu i odgovarajuće dokumentirani u medicinskoj dokumentaciji ili laboratorijskim zapisima.
Dok CSF može biti ključni podatak u istraživačkim protokolima, nepravilne tehnike prikupljanja mogu utjecati na dobrobit životinja. Pri podnošenju protokola potrebno je znanstveno obrazložiti broj i učestalost skupljanja. Konkretno, IACUC bi trebao pažljivo procijeniti svaki prijedlog koji uključuje prikupljanje CSF-a i razmotriti sljedeće:
1. Je li prikupljanje likvora ključno za postizanje znanstvenih ciljeva navedenih u protokolu?
2. Postoje li alternativne metode i manje invazivne metode procjene središnjeg živčanog sustava (kao što su slikovne tehnike) i ako postoje, jesu li razmatrane?
3. Jesu li operateri prošli odgovarajuću obuku i posjeduju li dovoljno vještina?
4. Hoće li se osigurati odgovarajuća perioperativna anestezija i analgetski režimi? Potrebno je potražiti savjetovanje s veterinarima laboratorijskih životinja u vezi s planovima za anesteziju i analgetike.
5. Uzima li prikupljeni volumen likvora u obzir dob i veličinu životinje?
6. Jesu li broj i učestalost duralnih punkcija prikladni za životinju i je li rizik od komplikacija sveden na minimum? Ako je višestruko prikupljanje likvora dio studije, potrebno je navesti maksimalno vrijeme prikupljanja za svaku životinju.
7. Je li postoperativni plan praćenja odgovarajući?
8. Jesu li uzete u obzir sve moguće postoperativne komplikacije i jesu li navedene sve razumne intervencije, uključujući eutanaziju?
